Etablera ett överförbart prokaryotiskt prime-editing-verktyg för sök-och-ersätt-genmodifiering

Viktiga resultat som projektet gav

Projektet syftade till att utveckla en överförbar prokaryot prime-editing-plattform för effektiv riktad genomredigering i tre industriella bakterier. Med en fluorescensbaserad screening visade ett preliminärt verktyg lovande resultat och avslöjade att gRNA-strukturen, som kan påverka dess nedbrytning, är avgörande för redigeringseffektiviteten. Dock testades inte andra verktygskomponenter på grund av tidsbegränsningar, vilket kräver vidare optimering för att förbättra verktygets prestanda.

Långsiktiga effekter som förväntas

Dessa resultat utgör en stark grund för vidare optimering av verktyget. För att fullt ut utnyttja dess potential krävs ytterligare strategier för att förbättra gRNA-stabiliteten och utforska andra verktygskomponenter. Dessutom är det viktigt att utvärdera olika målsajter och mutationstyper för en mer omfattande karaktärisering. Trots behovet av vidare förfining representerar detta verktyg ett betydande steg mot mer effektiv genomredigering i dessa arter, med viktiga tillämpningar inom bioteknik.

Upplägg och genomförande

Projektet utforskade samtidigt det kandidatverktyget i de tre utvalda arterna med en fluorescensbaserad screeningsstrategi. Inledningsvis var det utmanande att utveckla ett överförbart verktyg som fungerade i alla tre arter, främst på grund av behovet av olika plasmider för verktygets uttryck. Dock möjliggjorde användningen av en bredvärdsplasmid till slut uttryck i samtliga arter. Därefter genomfördes den planerade screeningen.