SMF UPSC: CRISPR för produktutveckling med hybridasp och eukalyptus som modeller

Viktiga resultat som projektet gav

Syftet var att utveckla kapacitet inom CRISPR/Cas9 och genredigering i träd. Två metoder att introducera CRISPR-modifieringar och därefter inaktivera eller ta bort CRISPR-komplexet har identifierats för att möjliggöra effektiv testning av nya genegenskaper i träd. Ett nytt vektorsystem har byggts och testats i hybridasp. Faktorer som ökar transient uttryck i Eukalyptus har testats. I kombination med att undersöka regenerering av modifierade skott med och utan selektion har förståelsen ökat för hur vi kan ta fram transgenfria, CRISPR-modifierade träd.

Långsiktiga effekter som förväntas

Metoderna som utvecklats och implementerats i (A) är viktiga både för storskalig testning av egenskapsgener och kvalitativa fältförsök, vilket i sin tur är en nödvändighet för kommersiell implementering av nya gentekniker. Det nya vektorsystemet utgör kärnan i det fortsatta utvecklingsarbetet. För produktion av transgenfria CRISPR modifierade Eukalyptus är de förbättringar i transformationsprotokoll och effektivare hantering av modifierade skott som utvecklats i (B) viktiga för fortsatt arbete med att nå en kommersiell produkt.

Upplägg och genomförande

För vektorsystemets uppbyggnad har fem strategier övervägts, tre utvärderats och två fungerande strategier kunnat identifieras. Omfattningen bidrog både till ökad och bredare kunskap om mekanismerna bakom och gav flexibilitet till det nya vektorsystemet. För transformationsutveckling har olika nivåer av hormoner som påverkar utveckling och tillväxt testats tidigt i processen. Under skottbildningen har medie med och utan selektion utvärderats vilket ökat vår kunskap kring vad som sker efter transformation, t ex vet vi nu att skott från samma startvävnad kan ha olika genotyp.